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DNA退火緩沖液（5×）

Annealing Buffer for DNA Oligos (5×)

產(chǎn)品貨號：JY04011       規(guī)格：2 mL       銷售價格：￥ 50

產(chǎn)品貨號：JY04012       規(guī)格：5 mL       銷售價格：￥ 100

Annealing Buffer for DNA Oligos 說明書.pdf

產(chǎn)品簡介

Annealing Buffer for DNA Oligos (5×)，即DNA寡核苷酸退火緩沖液，該退火緩沖液不僅可以用于常規(guī)DNA Oligos 的退火，而且特別適合于較難退火的構(gòu)建RNAi （siRNA 和shRNA）質(zhì)粒的DNA Oligos，可以有效避免DNA Oligos自身形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)，并且兩條Oligos退火后可以直接和經(jīng)酶切純化的質(zhì)粒連接。通常轉(zhuǎn)化后可以得到大量的陽性克隆。

保存條件

常溫配送。一個月內(nèi)，4 oC保存。-20 oC長期保存，至少1年有效。

注：瓶身標記MFG為生產(chǎn)日期，因為生化與分子試劑貯存得當，可用時間長于有效期，故標出生產(chǎn)日期，方便提示試劑實際已貯存時間。

注意事項

1．DNA退火緩沖液（5×）只適合于DNA Oligos的退火，不能用于RNA Oligos的退火。

2．本產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究，不得用于臨床診斷和治療，不得用于食品和藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

使用說明

1．溶解Oligos：

(1) 方法一：用雙蒸水將DNA退火緩沖液（5×）稀釋成1×。 → 將Oligos干粉用DNA退火緩沖液（1×）配制成20 μM。 → 取等體積DNA Oligo A和DNA Oligo B混勻。

(2) 方法二：將Oligos干粉用雙蒸水配制成50 μM。 → 配置如下退火反應(yīng)體系，混勻。

Note：Oligos的濃度根據(jù)實驗要求進行調(diào)整。

2．退火：

(1) 方法一：將退火反應(yīng)體系置于PCR儀中，設(shè)置反應(yīng)條件：95℃變性2 min，-1℃/30s/cycle緩慢降溫至25℃。程序設(shè)置以Bio-Rad的T100為例為：1. 95℃, 2:00; 2. 95℃, 0:30, -1℃ per cycle; 3. GOTO step 2, 70×; 4. 4℃, ∞。

  對于易形成發(fā)卡結(jié)構(gòu)的Oligos可以延長時間降溫時間：95℃變性2 min，-1℃/90s/cycl緩慢降溫至25℃。程序設(shè)置以Bio-Rad的T100為例為：1. 95℃, 2:00; 2. 95℃, 1:30, -1℃ per cycle; 3. GOTO step 2, 70×; 4. 4℃, ∞。

(2) 方法二：將退火反應(yīng)體系放于95°C水浴鍋，持續(xù)2 min，后將退火反應(yīng)體系置于一杯1 L，95°C的水中，讓其自然冷卻至室溫。若是易形成發(fā)卡結(jié)構(gòu)的Oligos，可以將95°C水放于保溫杯中開蓋降溫。

Note：緩慢降溫對形成正確的結(jié)構(gòu)是非常有幫助的，降溫過快將導(dǎo)致錯誤結(jié)構(gòu)的產(chǎn)生。

3．退火結(jié)束后可直接用于連接反應(yīng)，也可以-20oC凍存?zhèn)溆?。若進行酶切等其它反應(yīng)，可用純化試劑盒進行純化，或者確保退火產(chǎn)物在反應(yīng)體系中體積不超過5%，以避免退火緩沖液對后續(xù)酶反應(yīng)體系的干擾。