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慢病毒包裝和濃縮 / PRODUCT
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慢病毒包裝和濃縮
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293T，HEK-293T，人胚腎細(xì)胞
發(fā)布者： 發(fā)布時(shí)間：2022-10-22 14:22:37
293T，HEK-293T，人胚腎細(xì)胞
Human Embryonic Kidney 293T
產(chǎn)品貨號(hào)：JY03041 規(guī)格：> 1×10? cells（T25瓶/1mL凍存管） 銷售價(jià)格：￥ 600
細(xì)胞簡介
人胚腎細(xì)胞株293插入SV40 T-抗原基因后產(chǎn)生的高轉(zhuǎn)染效率的衍生株稱為293T。該細(xì)胞最初的名字293tsA1609neo，攜帶SV40復(fù)制序列，被廣泛用于逆轉(zhuǎn)錄病毒生產(chǎn)、基因表達(dá)和蛋白表達(dá)。
運(yùn)輸和保存
1．1 mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收貨后-80℃冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇。若發(fā)現(xiàn)干冰已經(jīng)揮發(fā)干凈、凍存管蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。
2．T25瓶培養(yǎng)的細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
培養(yǎng)瓶細(xì)胞接收后的處理
1．收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中靜置3-4 h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液體溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2．請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照，10倍和20倍各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后依據(jù)。
3．細(xì)胞收貨脫落：293T細(xì)胞貼壁能力弱，收貨如有大面積脫落的細(xì)胞團(tuán)為正?，F(xiàn)象。若細(xì)胞在快遞運(yùn)輸途中因振動(dòng)脫落，先將培養(yǎng)瓶放入37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置3-6 h，讓少數(shù)脫落的細(xì)胞可再附著生長。若仍有脫落聚集的細(xì)胞，則 (1) 收集所有細(xì)胞懸液，1000 rpm離心5 min，保留沉淀；(2) 添加胰蛋白酶消化液0.5 mL至離心管中，重懸沉淀，置于37℃消化1-2 min左右；(3) 向離心管內(nèi)加入5 mL完全培養(yǎng)基終止消化；(4) 1000 rpm，離心5 min，丟棄上清，用5 mL完全培養(yǎng)基（補(bǔ)加1-5% FBS，促進(jìn)貼壁）重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；(5) 待細(xì)胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
4．收貨細(xì)胞的培養(yǎng)和傳代：在顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，若細(xì)胞生長密度在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中的灌液培養(yǎng)基，加入新配制的完全培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)80%-90%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。
5．運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用合適的新鮮培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。
凍存細(xì)胞接收后的處理
收貨后-80℃冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇。
細(xì)胞復(fù)蘇：將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管置于37℃水浴中迅速搖晃解凍，回溫后噴以75 %酒精并擦拭之，移入無菌操作臺(tái)內(nèi)。將凍存管中細(xì)胞加入到含4-6 mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。1000 rpm離心3-5 min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶/培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)箱中孵育。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。
培養(yǎng)信息
細(xì)胞名稱 | 293T，HEK-293T，人胚腎細(xì)胞 |
別稱 | Hek293T; HEK-293T; HEK 293T; HEK-293-T; HEK 293 T; 293-T; 293 T; 293T; Human Embryonic Kidney 293T; 293tsA1609neo |
種屬來源 | Homo sapiens, human |
組織來源 | kidney; Embryo |
細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
生長特性 | 貼壁生長 |
生物安全等級(jí) | 1級(jí) |
傳代比例 | 1:3-1:5 |
換液頻率 | 每2-3天換液一次 |
生長培養(yǎng)基 | 10% FBS、高糖DMEM、1% Penicillin-Streptomycin |
培養(yǎng)條件 | 氣相：95% 空氣、5% CO2；溫度：37℃ |
凍存條件 | 90% FBS + 10% DMSO；液氮 |
支原體檢測 | 陰性 |
STR鑒定結(jié)果 | D5S818: 8,9 D13S317: 12,14 D7S820: 11 D16S539: 9,13 vWA: 16,19 THO1: 7,9.3 Amelogenin: X TPOX: 11 CSF1PO: 11,12 |
293T培養(yǎng)注意事項(xiàng)
1．293T貼壁能力較弱，加液、換液、洗滌時(shí)，須動(dòng)作輕柔，避免用液體直沖細(xì)胞，會(huì)造成細(xì)胞脫落。細(xì)胞生長不能過密，過密細(xì)胞容易脫落，脫落下來的細(xì)胞可以通過離心收集，使用胰酶消化后繼續(xù)培養(yǎng)。
2．293T細(xì)胞狀態(tài)直接影響病毒包裝效率。當(dāng)細(xì)胞傳代次數(shù)過多、細(xì)胞增殖速度減緩、細(xì)胞貼壁能力非常弱（輕柔換液也能導(dǎo)致細(xì)胞半數(shù)脫落）時(shí)，說明細(xì)胞狀態(tài)不好，會(huì)大幅降低病毒包裝效率。
3．使用高糖DMEM培養(yǎng)293T，低糖DMEM或者DMEM/F12等含糖量低的培養(yǎng)基可能影響293T細(xì)胞的生長狀態(tài)。
4．如果發(fā)生293T細(xì)胞不貼壁，漂浮在培養(yǎng)基中的現(xiàn)象，請(qǐng)確認(rèn)所使用的DMEM中碳酸氫鈉濃度及培養(yǎng)箱中CO2濃度。并參考以下培養(yǎng)體系：
① DMEM由1.5 g/L碳酸氫鈉配制而成，使用5% CO2培養(yǎng)箱。
② DMEM由3.7 g/L碳酸氫鈉配制而成，使用10% CO2培養(yǎng)箱。
當(dāng)使用碳酸氫鈉含量高的培養(yǎng)基時(shí)，必須將這些細(xì)胞在10% CO2中孵育，以便正確緩沖培養(yǎng)基。當(dāng)培養(yǎng)基沒有適當(dāng)緩沖時(shí)，293T細(xì)胞雖然可以存活，但將無法粘附并保持漂浮在培養(yǎng)基中。
5．培養(yǎng)時(shí)可酌情使用預(yù)鋪0.2%明膠的培養(yǎng)瓶/培養(yǎng)皿，若細(xì)胞狀態(tài)好，可省略此步驟。
6．本細(xì)胞僅用于科學(xué)研究，不得用于臨床治療。
7．請(qǐng)注意無菌操作，避免污染。
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